产品货号:
KL220525
中文名称:
多糖多酚植物RNA提取试剂盒
英文名称:
Polysaccharide and Polyphenol plant RNA Purification Kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是本公司根据很多植物多糖多酚的特点而专门开发的RNA纯化试剂盒,其提取纯化效果在100多种各类植物中得到验证。提取得到的RNA可直接用于RT-PCR、RT-LAMP、Northern杂交、cDNA合成等后续实验。
- 操作更加简单快速,处理一个样品只需要约十分钟。
- 所得到的RNA平均OD260/280在2.0左右。
- 含有专门去除多糖和多酚的成分,污染残留少。
- 本制品不适合纯化植物小RNA。
组分 | 规格 |
植物RNA提取溶液A | 50mL |
植物RNA提取溶液B | 15mL |
植物RNA提取溶液C | 50mL |
离心吸附柱 | 50套 |
通用洗柱液 | 50mL |
RNA洗脱液 | 10mL |
保存:室温,有效期1年,其中溶液B需要4℃保存。
氯仿
植物RNA提取溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀,使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后才能取用。
- 每次微量提取需要100~200mg植物叶片、或50~100mg植物种子、或200~500mg植物果实。
- 样品破碎:
- 匀浆法:先将新鲜植物组织剪切成小块,放入10~15mL塑料离心管中,加入1mL植物RNA提取溶液A,然后用Polytron剪切式匀浆器匀浆5~20秒,然后见匀浆液转移到1.5mL塑料离心管中。匀浆时会产生泡沫,但不影响提取效果。不能用玻璃的、分离线粒体和叶绿体的匀浆器。
- 液氮研磨法(适用于复杂,易降解样品):取适量新鲜植物组织放入含液氮的研钵中,迅速将组织研磨成粉末后,将粉末转移到1.5mL的塑料离心管中,加入1mL植物RNA提取溶液A,立即剧烈振荡20秒,充分混匀。
- 匀浆法:先将新鲜植物组织剪切成小块,放入10~15mL塑料离心管中,加入1mL植物RNA提取溶液A,然后用Polytron剪切式匀浆器匀浆5~20秒,然后见匀浆液转移到1.5mL塑料离心管中。匀浆时会产生泡沫,但不影响提取效果。不能用玻璃的、分离线粒体和叶绿体的匀浆器。
- 在装有匀浆液或研磨物的1.5mL离心管中加入0.3mL的植物RNA提取溶液B和0.2mL自备氯仿,在振荡器上振荡30秒混匀,此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
- 室温13000g离心5分钟,两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
- 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中,下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质,避免触及或吸取。
- 加入等体积的植物RNA提取溶液C,充分颠倒混匀。如果有沉淀产生(对某些植物,属于正常现象),千万不要去掉沉淀。
- 将一半的溶液(如果有沉淀,则先混匀后一起取用)转移到离心吸附柱中,13000g室温离心半分钟,弃穿透液。
- 将剩下的一半溶液(如果有沉淀,则先混匀后一起取用)转移到同一离心吸附柱中,13000g室温离心半分钟,弃穿透液。
- 加0.7mL通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。再加0.3mL通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。
- 室温离心半分钟。此步十分重要,否则残留的洗柱液会影响RNA的使用。
- 将离心吸附柱转移到一个自备的干净的RNase-free收集管中,加入50μL RNA洗脱液,室温放置1分钟。
- 13000g室温离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
RNA检测:
- RNA完整性的电泳检测:如果需要做Northern杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子。如果电泳发现DNA污染严重(跟样品相关)建议使用含有RNase-free DNase处理步骤的植物RNA纯化试剂盒(过柱法,含DNase),也可以另购RNase-free DNase降解DNA。
- RNA产量产率测定:将1μL RNA跟1uLTE缓冲液中(pH7.5~8.2之间)混合,然后在NanoDrop上测其在OD260的光吸收和浓度,进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/植物组织用量)。
- RNA纯度测定:无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8~2.1之间,高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响RT-PCR等反应。
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